《分子生物学》学习小记（四）-研究基因工具

冰下的火圆

分子生物学研究三大支撑技术：凝胶电泳的分子分离、标记示踪、杂交。
凝胶电泳：用于把各种DNA、RNA和蛋白质分离开。核酸电泳中常用琼脂糖作为凝胶。蛋白质电泳中常用聚丙烯酰胺。
DNA因为骨架上磷酸而带有负电，在电流作用下向正极移动，由于分子大小不同，受摩擦力不同，因此迁移速度存在差别，最后就可以得到迁移距离和分子质量关系。
DNA如果过大，移动距离与分子质量会偏离线性关系，还会发生断裂。
双向凝胶电泳通过第一向等电聚焦和第二项 SDS-PAGE可以很好分离多肽。
离子交换层析：利用树脂分离携带不同电荷的物质。
凝胶过滤层析通过利用分子大小，通过树脂孔力区分小分子和大分子。
亲和层析是一种利用与目的分子有很强的专一亲和性试剂机型分离的纯化技术。

示踪标记：当示踪物是放射性的，可通过X射线发射自显影、磷屏成像或者液体闪烁计数法检测。非放射性示踪利用酶的倍增效应，完成化学发光，并配合发色底物完成。
DNA分型和DNA指纹了完成对亲子鉴定、罪犯鉴定等。

高通量DNA测序
焦磷酸测序：DNA聚合酶复制待测的DNA，实时地每个核苷酸渗入进行测序。每个核苷酸的渗入释放一个焦磷酸（PPi），将焦磷酸与光联系起来进行定量测定。
Illumina：扩增短小的DNA片段，在紧密排列的支持物表面的微小斑块里面进行，通过添加荧光链的终止核苷酸完成测序。通过CCD完成观察后，荧光和链终止基团被去除，从而重复进行上面过程。