易混淆的生物学知识21-关于养细胞

朝霞698

作为一个生物相关专业的学生：经常有一些搞不懂的生物学常识21-关于养细胞

• 如何储存细胞？有哪些方法？
  储存细胞是维护细胞系的关键步骤之一，以下是一些常用的储存细胞的方法：
  液氮冷冻：将细胞冷冻在液氮中，以-196℃的温度长期储存。此方法储存方便，能够长期保持细胞的稳定性和功能，适合于大规模储存。
  冷藏：将细胞放置在4℃的温度下储存。此方法相对液氮冷冻来说储存时间较短，一般适用于临时储存或者短期储存。
  冻干：将细胞在低温下冻干，然后在干燥剂中保存。此方法储存方便，能够长期保存细胞的稳定性和功能，适合于长途运输和长期储存。
  胎牛血清：在胎牛血清中加入10% DMSO（二甲基亚砜），将细胞冻存储存在液氮中。此方法能够有效地保持细胞的稳定性和功能，适用于特殊的细胞系，但需要注意胎牛血清的质量和来源。
  需要注意的是，不同的细胞系可能对储存方法有不同的要求，需要根据具体情况选择合适的方法。同时，在储存过程中需要注意细胞的存储条件和时间，以避免细胞质量的损失和降低细胞的存活率。
  
• 以上四种方法，细胞还有活性吗？
  以上介绍的四种方法中，液氮冷冻和冷藏能够保持细胞的较高活性，冻干和胎牛血清中加入DMSO的方法在一定程度上也能够维持细胞的活性，但相对于前两种方法来说，细胞活性可能有所下降。
  在储存细胞的过程中，细胞的质量和存储条件等因素都会影响细胞的活性。为了保证细胞储存后的质量和活性，需要注意以下几点：
  在储存前，需要对细胞进行一定的预处理，例如选择生长状态最佳的细胞、添加保护剂等。
  在储存过程中，需要注意温度、湿度等环境因素，避免因存储条件不当导致细胞质量下降。
  在恢复细胞时，需要选择合适的方法进行处理，例如缓慢加入培养基、温度逐渐升高等。
  总之，储存细胞的方法和条件会对细胞的活性产生一定的影响，需要根据具体情况选择合适的储存方法并注意细胞的质量和存储条件。
  
• 4℃能放多久？
  在4℃的温度下，细胞的代谢活动速度减缓，但并不是完全停止。因此，细胞在4℃下的存储时间不宜过长，通常建议不超过一周。如果需要长期储存，应该选择更为适宜的储存方法，例如液氮冷冻或冻干等。同时，在储存细胞的过程中，需要注意细胞的生长状态和存储条件等因素，以保证细胞的存活率和活性。
  
• 细胞在什么状态下冻存效果比较好？
  细胞在冻存前应该处于最佳的生长状态，这样冻存后才能够保持较高的存活率和活性。一般来说，细胞在对数生长期（log phase）时，代谢活动最为活跃，细胞分裂速度最快，细胞冻存效果也最佳。
  此外，细胞在冻存前还应该进行适当的处理，例如添加保护剂、调整细胞密度等，以提高细胞的冻存效果。常用的保护剂包括DMSO、甘油等，可以在细胞冻存前将其加入培养基中，以减少细胞在冻存和解冻过程中的损伤。
  需要注意的是，不同类型的细胞对于冻存条件的要求有所不同，因此在具体操作时应该根据不同类型的细胞选择合适的冻存条件，以保证冻存效果的最佳化。
  
• 平台期的细胞冻存会怎么样？
  平台期指的是细胞在培养基中已经停止生长和分裂，进入了一种稳定的状态，此时细胞的代谢活动和生长速率明显减缓。如果在这种状态下进行细胞冻存，细胞的存活率和活性可能会受到一定影响。
  一般来说，细胞在对数生长期时冻存效果最佳，因为此时细胞处于代谢活跃、分裂速度快的状态，更易于适应冷冻和解冻过程。而如果细胞已经进入平台期，存活率和活性可能会受到一定的影响，因为此时细胞代谢活动减缓，对冷冻和解冻过程中的损伤也更为敏感。
  因此，对于细胞冻存，建议在细胞处于对数生长期时进行，以保证冻存效果的最佳化。如果必须在平台期进行细胞冻存，可以考虑添加适当的保护剂或者采用特定的冻存方案，以提高细胞的存活率和活性。
  
• 如何判断细胞状态好不好，老没老，如何判断自己的细胞该不该换掉？
  判断细胞状态好不好主要从以下几个方面入手：
  观察细胞形态：正常状态下的细胞应该具有特定的形态和大小，且细胞形态应该是均一的。如果发现细胞形态异常、不规则或变小，可能意味着细胞状态已经出现问题。
  观察细胞增殖能力：正常状态下的细胞应该具有较高的增殖能力，可以通过观察细胞生长速度或细胞倍增时间等参数来评估细胞的增殖能力。
  流式细胞术或荧光染色：流式细胞术可以用来评估细胞的健康状态、表面标记物、细胞周期等。荧光染色可以用来观察细胞形态、细胞核分裂等，对于检测细胞是否老化有一定帮助。
  检测细胞代谢产物：可以通过检测细胞培养基中的代谢产物来判断细胞状态，如乳酸、谷氨酸、葡萄糖等。
  如果细胞状态出现问题，可以考虑更换培养基、增加营养成分、降低温度等措施来提高细胞状态。如果问题仍然无法解决，可能需要更换细胞系或重新构建细胞系。一般来说，细胞系应该定期检查并更换，以确保实验数据的可靠性。
  
• 如何通过普通光学显微镜初步判断自己的细胞状态如何？
  通过普通光学显微镜可以初步判断细胞状态如何，具体步骤如下：
  观察细胞形态：正常状态下的细胞应该具有特定的形态和大小，且细胞形态应该是均一的。使用普通光学显微镜观察细胞形态，包括细胞大小、形状、粘附性等，如果发现细胞形态异常，可能意味着细胞状态已经出现问题。
  观察细胞密度：正常状态下的细胞应该具有适当的密度，过高或过低的密度都可能影响细胞生长和代谢。使用普通光学显微镜观察细胞在培养皿中的密度，可以初步评估细胞状态。
  观察细胞数量：正常状态下的细胞数量应该逐渐增加，过低的增殖速率可能意味着细胞状态不佳。使用普通光学显微镜观察细胞在培养皿中的数量变化，可以初步评估细胞状态。
  需要注意的是，使用普通光学显微镜进行初步判断只是一个大致的评估，对于细胞状态的准确评估还需要结合其他指标和方法进行综合分析。同时，细胞状态的变化可能是逐渐发生的，因此需要定期观察和评估。
  如何复苏细胞？有哪些方法？不同细胞有什么需求？
  细胞的复苏过程可以分为两个阶段：解冻和复苏。解冻是将冻存的细胞快速回温至0℃以上，以避免冰晶对细胞的伤害；复苏是在细胞解冻后，逐渐回温，将细胞恢复到正常生长状态。下面是一些常用的复苏方法：
  快速解冻法：将冻存细胞快速浸泡在37℃的水中，直到细胞完全解冻为止。这种方法简单易行，但容易造成细胞伤害。
  缓慢解冻法：将冻存细胞放在4℃冰箱中缓慢解冻，避免冰晶对细胞造成伤害。这种方法相对于快速解冻法更为保护细胞。
  使用复苏培养基：将解冻后的细胞转移到含有适当营养物质和生长因子的培养基中，帮助细胞恢复生长和增殖。
  不同类型的细胞在复苏过程中有不同的需求。一些细胞需要特定的生长因子和培养基，以帮助它们恢复生长和增殖。一些细胞还需要特定的细胞培养条件，如CO2浓度和温度等。因此，在复苏之前，需要对特定细胞的生长和营养需求进行了解和调查，以便为其提供适当的培养条件。
  
• 哪些细胞适合快速解冻，哪些适合缓慢解冻？列举一些实验室常见的细胞
  不同种类的细胞可能对解冻方式有不同的适应性，但一般来说，以下是一些通用的原则：
  快速解冻：适用于比较脆弱的细胞类型，如淋巴细胞、骨髓细胞、卵细胞等。快速解冻可以减少冰晶对细胞的伤害，可以使用37℃水浴、热气流、微波等方法来快速解冻。
  缓慢解冻：适用于一些比较敏感的细胞类型，如肝细胞、心肌细胞、神经细胞等。缓慢解冻可以避免快速解冻对细胞的机械性和温度性伤害。可以在4℃冰箱中缓慢解冻，或者使用逐渐增加的浓度的培养基等方法来缓慢解冻。
  以下是一些常见的实验室细胞的解冻方式：
  HEK293、293T细胞：快速解冻
  HeLa细胞：快速解冻
  RAW264.7细胞：快速解冻
  SH-SY5Y细胞：缓慢解冻
  PC12细胞：缓慢解冻
  HUVEC细胞：缓慢解冻
  
• 快速解冻列举20个，缓慢解冻列举20个
  快速解冻适用于某些比较耐受的细胞，常见的包括：
  HEK293T
  CHO-K1
  COS-7
  MCF-7
  HCT116
  NIH/3T3
  A549
  HepG2
  K562
  PC12
  U87-MG
  SK-N-SH
  SH-SY5Y
  BT-474
  MDA-MB-231
  T47D
  RAW264.7
  Jurkat
  THP-1
  HL-60
  缓慢解冻适用于一些较为敏感的细胞，常见的包括：
  PBMCs
  T cells
  B cells
  Neutrophils
  Monocytes
  Macrophages
  Dendritic cells
  HUVECs
  Endothelial cells
  Fibroblasts
  Epithelial cells
  Astrocytes
  Oligodendrocytes
  Microglia
  Schwann cells
  Chondrocytes
  Cardiomyocytes
  Hepatocytes
  Pancreatic β cells
  Neural stem cells
  
• 缓慢解冻的列举细胞系20个
  以下是一些适合缓慢解冻的细胞系：
  CHO（Chinese Hamster Ovary）细胞系
  HEK293（Human Embryonic Kidney 293）细胞系
  HeLa（Henrietta Lacks）细胞系
  MCF-7（Michigan Cancer Foundation-7）细胞系
  NIH/3T3（National Institutes of Health-3T3）细胞系
  PC12（Pheochromocytoma-12）细胞系
  RAW264.7（Mouse Leukemia Virus-Induced Tumor-Associated Macrophage）细胞系
  SH-SY5Y（Human Neuroblastoma）细胞系
  U2OS（Human Osteosarcoma）细胞系
  Vero（African Green Monkey Kidney Epithelial）细胞系
  293FT细胞系
  A549（Human Lung Carcinoma）细胞系
  COS-7（African Green Monkey Kidney Fibroblast）细胞系
  HCT116（Human Colorectal Carcinoma）细胞系
  HEK293T/17细胞系
  HepG2（Human Liver Carcinoma）细胞系
  Jurkat（Human T Cell Leukemia）细胞系
  K562（Human Chronic Myelogenous Leukemia）细胞系
  L929（Mouse Fibroblast）细胞系
  PANC-1（Human Pancreatic Carcinoma）细胞系
  需要注意的是，不同的细胞系对缓慢解冻的速度和方法有不同的要求，因此在进行缓慢解冻前应先了解相关文献或咨询专业人士。
  
• 为什么有的细胞既可以快速又可以缓慢解冻？
  细胞的快速或缓慢解冻方法取决于其特性和对冻存过程的耐受性。一些细胞具有较高的冻存适应性，可以在快速解冻条件下存活，而对于另一些细胞，使用缓慢解冻方法可以减少它们的受损程度，提高其复苏率。
  这些特性和适应性的差异可能来源于细胞的来源、类型、品系等因素，以及细胞在冻存前的处理方式，如冻存液配方、冷冻速率等因素。此外，不同实验室之间的实验条件和操作流程也可能会导致不同细胞的快速或缓慢解冻表现不同。因此，针对不同细胞的冻存和解冻过程需要根据实验室的具体情况进行优化和调整。
  
• 比如A549这个细胞，既有快的又有慢的是怎么回事？
  A549细胞是一种人类肺腺癌细胞系，是常用的肺癌研究细胞模型之一。关于A549细胞可否进行快速解冻还是缓慢解冻的问题，一般情况下建议进行缓慢解冻。但是实际情况中，根据不同的实验需求和实验经验，有些实验室也会采用快速解冻的方法。
  需要注意的是，快速解冻和缓慢解冻并不是细胞系本身属性的问题，而是取决于细胞在冷冻过程中受到的损伤程度以及在解冻过程中能否迅速适应温度变化等因素。因此，不同实验室、不同研究者在处理同一种细胞系时，可能会选择不同的解冻方法，这取决于他们的实验经验和具体情况。
  
• 无血清细胞冻存液的成分是什么？如果实验室比较穷，该如何配制？
  无血清细胞冻存液的成分通常包括：
  细胞培养基：提供细胞生长所需的营养物质和适宜的环境；
  DMSO（二甲基亚砜）：起到保护细胞的作用，有助于细胞在低温下存活；
  葡萄糖或其它碳源：提供能量，有助于细胞存活；
  补体物质或血清替代物：为细胞提供必要的生长因子和支持细胞生长。
  如果实验室比较穷，可以自制简易的无血清细胞冻存液。一般来说，可以在细胞培养基中添加10-20%的甘油或乙二醇，作为保护剂来保持细胞的完整性。此外，DMSO也可以用甘油或乙二醇来代替。需要注意的是，自制的无血清细胞冻存液可能稳定性和效果并不如商业制备的无血清冻存液，所以在实验设计中需要考虑到这一点。
  
• 商业的无血清冻存液该如何配制，比例是多少？
  商业的无血清冻存液通常已经配制好，直接购买即可使用。不同品牌和型号的无血清冻存液配方可能会有所不同，需要根据具体产品的说明书进行配制和使用。一般来说，商业的无血清冻存液成分包括细胞培养基、DMSO（二甲基亚砜）等保护剂，具体比例可以根据产品说明进行调整。在使用商业的无血清冻存液时，需要按照产品说明进行储存和使用，以保证细胞的存活率和质量。
  
• 实验室常见的细胞系的对数生长期是多久？列举20个。俗称的几天传细胞是什么意思？
  实验室常见的细胞系的对数生长期（generation time）因细胞类型、培养条件等因素而异，一般在几小时到几天不等。以下是20个常见的细胞系的对数生长期：
  HEK293T：约24小时
  HeLa：约24小时
  MCF-7：约36-48小时
  NIH3T3：约18-20小时
  RAW264.7：约16-18小时
  A549：约24-48小时
  SH-SY5Y：约24-36小时
  HepG2：约40-48小时
  PC12：约24-36小时
  COS-7：约24-36小时
  U2OS：约24-36小时
  Caco-2：约36-48小时
  SKOV3：约24-48小时
  HUVEC：约24-36小时
  HCT116：约18-24小时
  THP-1：约24-36小时
  Jurkat：约24-36小时
  SW620：约36-48小时
  U87MG：约36-48小时
  BT549：约36-48小时
  “几天传细胞”指的是细胞系在培养皿中生长至一定程度后，用胰酶等消化酶将其从底物中剥离出来，重新分散在新的培养皿中进行继续培养的过程。在传代的过程中，通常会按照一定比例将细胞分散到新的培养皿中，一般为1:2到1:4，即将原来的细胞数分成两到四份分别分散到新的培养皿中。这样做的目的是保持细胞系的健康生长，并延长细胞系的使用寿命。
  
• 对数生长期与几天传之间的关系是什么？
  对数生长期和几天传都是描述细胞生长状态的指标。
  对数生长期是指细胞在培养基中处于指数生长期的时间段，即细胞数呈指数增长的时间段。在对数生长期内，细胞生长速度最快，因此通常用来进行细胞培养、分裂和传代。
  几天传则是指根据细胞的对数生长期，每隔几天就将细胞按一定比例进行传代，以保持细胞处于对数生长期。通常选择细胞的对数生长期末期进行传代，这样可以保证传代后的细胞数最多，从而更容易得到充足的细胞用于后续实验。
  具体来说，根据细胞系的不同，其对数生长期会有所差异，因此几天传的周期也会有所不同。一般来说，常见的细胞系对数生长期在1-3天之间，几天传周期一般为2-5天。例如，HEK293细胞的对数生长期约为24-36小时，因此一般每2-3天进行一次几天传；而NIH/3T3细胞的对数生长期约为18-24小时，因此一般每2天进行一次几天传。
  
• 如果实验室比较穷，没有生物安全柜，只能在超净工作台里面传细胞的话，实验室管理和实验操作人员需要有哪些规范操作可以避免污染？
  在没有生物安全柜的情况下，在超净工作台中进行细胞培养和传代需要注意以下几点规范操作：
  确保工作区域干净、整洁：在开始工作前，用70%乙醇擦拭超净工作台表面，放置必要的工具、试剂等，并戴好口罩、手套等个人防护用品。
  准备好所需的培养物料：包括细胞培养基、无菌吸管、离心管、显微镜玻片、移液器、离心机等。
  保持无菌操作：在进行细胞培养和传代的过程中，所有操作必须在无菌条件下进行。对于培养基、培养器具等均应进行无菌处理，以保证细胞的无菌培养环境。
  避免交叉污染：在进行不同细胞系的细胞培养和传代时，要注意避免细胞之间的交叉污染。可以用不同的培养器具或用70%乙醇擦拭工具，防止细胞的交叉污染。
  定期对工作台进行消毒：在工作结束后，对工作台进行彻底清洁和消毒。使用70%乙醇或含氯消毒液擦拭工作台表面，以杀灭可能存在的污染细菌。
  需要注意的是，在没有生物安全柜的情况下进行细胞培养和传代的风险较高，容易引起细胞交叉污染、培养基污染等问题。因此，建议尽快购置生物安全柜等实验室基础设施，以提高实验的安全性和可靠性。
  
• 细胞实验室的环境有哪些规范？
  细胞实验室的环境需要遵守一些规范，以保证实验的准确性、可靠性和安全性。以下是常见的细胞实验室规范：
  实验室安全：细胞实验室需要建立安全意识，遵守实验室安全规定。使用化学品、生物制品和放射性物质时需要按照安全操作程序进行，避免人员和环境受到伤害。
  空气洁净度：细胞实验室应该保持干净、无尘、无菌的环境。定期对实验室进行清洁，避免污染。
  试剂品质：细胞实验中使用的试剂需要保证品质稳定、纯度高、无细菌污染、无内毒素等。建议使用经过认证的商业化试剂。
  培养物温度：细胞培养需要在适宜的温度下进行，通常为37℃。培养室需要保持恒温，避免温度波动影响细胞生长。
  培养物湿度：细胞培养需要在适宜的湿度下进行，通常为95%。建议在培养箱中添加水盘，保持湿度。
  无菌操作：细胞实验需要进行无菌操作，防止细菌和真菌的污染。实验操作前需要进行消毒，使用无菌器材，避免接触不同菌株。
  培养物储存：细胞储存需要进行液氮冻存，避免细胞失活和突变。储存过程需要遵循液氮冻存规范操作。
  实验记录：细胞实验需要进行详细的实验记录，包括细胞来源、处理过程、结果等。建议使用标准实验记录表格，记录每个实验的详细信息。
  实验室管理：细胞实验室需要建立健全的管理制度，包括实验室出入管理、试剂储存管理、设备维护保养等。建议制定相应的管理制度，保障实验室的安全和稳定运行。
  人员培训：细胞实验需要有专业的人员进行操作，需要进行相关的培训和考核。建议定期进行技能培训和实验操作考核，提高实验操作技能和质量水平。
  总之，细
  细胞实验室的环境规范主要包括以下方面：
  清洁和消毒：细胞实验室必须保持清洁和消毒，避免细菌、真菌、病毒等污染物的存在。工作台、仪器、培养箱、试剂瓶、培养皿等都需要定期清洁和消毒。
  空气质量：细胞实验室需要保证空气质量，避免微生物、粉尘等污染物的存在。室内空气应保持流通，并安装空气过滤器等设备。
  温度和湿度：细胞实验室需要保持恒定的温度和湿度，以维持细胞的正常生长状态。通常，细胞实验室的温度控制在20-25℃，相对湿度控制在40-60%。
  光照：细胞实验室需要控制光照条件，以避免对细胞产生不良影响。一般来说，实验室应该使用人造光源，并控制光照时间和强度。
  噪音和震动：细胞实验室需要控制噪音和震动，以避免对细胞产生不良影响。实验室应该安装隔音设备和减震装置，并且控制实验人员的噪音和震动。
  安全设施：细胞实验室需要配备相应的安全设施，如生物安全柜、化学通风柜、紫外线消毒器、应急喷淋系统等，以保障实验人员的安全和实验室的安全。
  废物处理：细胞实验室产生的废物需要得到妥善处理，避免对环境和人体造成污染和危害。废物分类、储存和处理应符合相关法规和规范。
  
• 如何保持空气洁净度？靠扫地、拖地吗？
  维持细胞实验室空气洁净度的主要方法是通过空气过滤系统和空气净化设备来实现。一般实验室中会配置空气过滤器和空气净化器，通过滤网、UV灯等装置过滤、净化空气中的微生物、灰尘、有机物等污染物质，从而保证实验室内空气的洁净度。此外，在实验室内也可以通过减少活动人数、控制温度、湿度等措施来降低空气污染。当然，也需要注意定期清理实验室地面和设备表面的尘埃和杂物，以维护实验室整洁度和环境卫生。
  
• 如果实验室没有空气过滤系统和空气净化设备，该怎么办呢？只有一间细胞房，除了温箱、冰箱、安全柜，离心机、显微镜，其余的仪器没了，该怎么办？
  

如果实验室没有空气过滤系统和空气净化设备，可以采取以下措施：
做好门窗密封，防止外界污染进入实验室；
定期打扫实验室环境，保持整洁；
定期更换空调过滤网，并对空调进行清洁维护；
避免在实验室内吸烟、喝水、进食等活动，以减少灰尘和微生物的扩散；
使用干净的、无菌的实验器材和培养基，避免污染细胞培养。
如果只有一间细胞房，可以采取以下措施：
确保实验室环境整洁，定期打扫卫生；
根据实验需要，适当选配必要的实验仪器；
合理规划实验操作，避免交叉污染；
严格遵守实验室安全操作规程，保障实验人员安全；
定期对实验器材进行消毒和清洁，避免交叉污染；
对细胞进行正确的处理和管理，定期检测细胞的污染情况。